江蘇綠盟科學儀器有限公司

黃曲霉毒素免疫親和柱

簡介

    AFT免疫親和柱適用于基質(zhì)復雜、限量要求低的樣品中黃曲霉毒素B1，B2，G1，G2檢測的凈化。可以進行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA的定量分析，適用于谷物，食品，飼料等的樣品凈化過程。

柱容量  約200ng 黃曲霉毒素

儲存條件  2-8℃冷藏保存，不可冷凍

1 用途

用于實驗室凈化樣品提取物以進行進一步分析

2 概要

黃曲霉毒素是谷類及其他農(nóng)作物常見的霉變菌，是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類低分子化合物。污染糧食、油料作物的種子，其中以花生、玉米易被污染，另外在小麥、高粱、巴西堅果、豆類和大米等重要糧食中也經(jīng)常被檢出。

黃曲霉毒素熱穩(wěn)定性很高，一旦產(chǎn)生便難以除去。對動物、植物和微生物具有很強的毒性，致癌力強，還能引起突變和導致畸形。

黃曲霉毒素作為肝癌的三大誘因之一，也是胃癌，腸癌等疾病的主要原因，對人類的健康構(gòu)成很大威脅。世界各國對食品，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的限量標準。

3 原理

測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，免疫親和柱中含有和黃曲霉毒素抗體結(jié)合在一起的凝膠，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后緩慢的通過黃曲霉免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)黃曲霉毒素與抗體結(jié)合，其他的無關(guān)物質(zhì)不會結(jié)合而直接通過免疫親和柱，之后洗滌免疫親和柱完全除去沒有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì)。后加入甲醇將黃曲霉毒素釋放，然后注入到分析儀器中進行進一步的檢測。

4 提供的試劑

l 25支/盒免疫親和柱，規(guī)格：1ml/3ml

5  操作者應(yīng)注意事項

l 黃曲霉毒素對人體有害，應(yīng)戴手套操作。

l 使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液宜用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過夜。

l 不要使用過了有效日期的免疫親和柱。

l 親和柱于2-8℃冷藏保存，不可冷凍

l 使用前，免疫親和層析柱需回至室溫（22~25℃）

6 操作流程（符合GB/T 18979-2003國標方法）

l 粉碎好的樣品過20目篩并在取樣前徹底混合，不立即分析的樣品應(yīng)放在冰箱中儲存。

l 稱取20g粉碎樣品及4g氯化鈉，加入100ml 70%甲醇/水。

l 高速均質(zhì)約2分鐘，或震蕩器震蕩約30分鐘，

l 過濾樣品至少10ml。

l 取10ml濾液加入20ml水，徹底混合。

l 用玻璃纖維濾紙過濾至澄清，取15ml準備加入到免疫親和柱中過柱。

l 將10ml注射器連接于免疫親和柱上端。

l 處理好的樣品液15ml以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱，棄掉流出的液體。

l 加10ml水淋洗柱子兩次，棄掉流出的液體，

l 利用真空設(shè)備壓入空氣或用注射器吹干柱子中的水。

l 加入1ml甲醇緩慢洗脫，流速約為2-3秒每滴。

l 收集全部洗脫液于干凈的比色皿或其他容器中用于檢測。

7 操作流程圖

8 液相色譜測定條件

● 激發(fā)/發(fā)射波長：360nm/440nm

● 流動相：甲醇-水（45+55）

● 流速：0.8mL/min

● 進樣量：20ul 

● 柱溫：30°C 

● 反應(yīng)時間：10min

用進樣器吸取20μL黃曲霉毒素標準工作液注入HPLC

色譜儀，在上述色譜條件下測定標準溶液的響

應(yīng)值（峰高或峰面積），得到黃曲霉毒素B1、B2、 

G1、G2標準溶液HPLC色譜圖